变性细胞裂解液
货号:ZK-PL4198
规格:50ml 500ml
描述:组织细胞裂解缓冲液,为您提供完整的组织、细胞总蛋白制备方案,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。裂解液中含有去氧胆酸钠和EDTA,裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。
储存:4℃保存 12个月有效
规格:50ml 500ml
操作步骤:
制备细胞裂解产物:
1.800g 4℃离心 5 分钟收集培养细胞,估计细胞离心后的体积(PCV, 106 cells=~20ul, 107 cells=~100ul PCV);
2.每 50~100ul PCV 加入5倍体积组织细胞裂解缓冲液(250~500ul),冰浴放置10分钟,每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒;
3.12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物
注意:假如所得蛋白产物较为粘稠,可先95℃加热5分钟,迅速冰浴5分钟,然后再进行步骤3
制备组织裂解产物:
1.取 50-100mg 组织在冰上剪成碎片,用预冷的 PBS 洗涤2次离心弃去 PBS;
2.加入 0.5-1ml 预冷的组织细胞裂解缓冲液;
3.4℃用玻璃匀浆器匀浆 20-40 次,直到 95%的细胞被破碎,然后在冰浴中放置10分钟,并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒;
4.12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物;
注意:假如所得蛋白产物较为粘稠,可先95℃加热5分钟,迅速冰浴5分钟,然后再进行步骤4
说明:1.在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物;
2.在做免疫沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取,以避免某些不稳定蛋白的降解;
3.在该裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂,用户可自行选择进行添加。