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Western及IP裂解液
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Western及IP裂解液

 详情说明

​Western及IP裂解液

货号:ZK-PL3486

规格:100ml  500ml

描述:

IP裂解缓冲液,为您提供完整的组织、细胞总蛋白制备方案。

IP裂解缓冲液(C1054)能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非变性条件下的裂解蛋白产物最大限度地保留了蛋白的特性和功能,如抗原-抗体结合能力或酶学活性,因此适宜于进行免疫共沉

规格:

100ml   500ml

制备细胞裂解产物:

1. 800g4℃离心5分钟收集培养细胞,而后用预冷的PBS洗涤细胞两次。估计细胞离心后的体积(PCV,106cells=~20ul,107cells =~100ulPCV);

2. 每50~100mlPCV加入5倍体积IP裂解缓冲液(250~500ml),涡旋震荡10秒,冰浴放置20分钟;

3. 12000g4℃离心15分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物,

制备组织裂解产物:

1. 取50-100mg组织在冰上剪成碎片,用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS;

2. 加入0.5-1ml预冷的IP裂解缓冲液;

3. 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次,直到95%的细胞被破碎,涡旋震荡10秒,冰浴放置20分钟;

4. 12000g4℃离心15分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物,可用于后续的免疫沉淀或者Western Blot等实验。

注意:

1. 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物;

2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取,以避免某些不稳定蛋白的降解;

3. 在该裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂,用户可自行选择进行添加。


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