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组织细胞裂解液(含脱氧胆酸钠)
货号:ZK-PL4196
规格:100ml 500ml
描述:组织细胞裂解缓冲液,为您提供完整的组织、细胞总蛋白制备方案,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。裂解液中含有去氧胆酸钠和EDTA,裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。
储存:
4℃保存。
规格:
100ml 500ml
制备细胞裂解产物:
1.800g4℃离心5分钟收集培养细胞,估计细胞离心后的体积(PCV,106cells=~20ul,107cells=~100ul PCV);
2.每50~100ulPCV加入5倍体积组织细胞裂解缓冲液(250~500ul),冰浴放置10分钟,每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒;
3.12000g4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物;
注意:假如所得蛋白产物较为粘稠,可先95℃加热5分钟,迅速冰浴5分钟,然后再进行步骤3
制备组织裂解产物:
1.取50-100mg组织在冰上剪成碎片,用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS;
2.加入0.5-1ml预冷的组织细胞裂解缓冲液;
3.4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次,直到95%的细胞被破碎,然后在冰浴中放置10分钟,并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒;
4.12000g4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物;
注意:假如所得蛋白产物较为粘稠,可先95℃加热5分钟,迅速冰浴5分钟,然后再进行步骤4
说明:
1.在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物;
2.在做免疫沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取,以避免某些不稳定蛋白的降解;
3.在该裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂,用户可自行选择进行添加。
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