​细菌总蛋白非变性提取试剂

货号：ZK-PL3510

产品描述：

细菌蛋白提取试剂Ⅰ(非变性)采用温和的非离子型去污剂，能够从细菌中提取得到可溶性蛋白，用细菌蛋白提取试剂Ⅰ(非变性)制备的蛋白产物保持了生物学活性，适用于后续的Western Blot、免疫沉淀、免疫共沉淀、蛋白纯化等实验。

适用范围：

从新鲜或者冻存的细菌中提取蛋白。

规格：

25ml 或 100mL.

储存:

4℃保存 12个月有效

提取方法：

1. 将细菌培养物在预先称重的离心管中4ºC，5000g离心15分钟，收集菌体；

2. 去上清，称量菌体重量，按照每克菌体加入10-50ml细菌蛋白提取试剂Ⅰ(非变性)，涡旋震荡使菌体完全重悬；

3. 室温孵育15-20分钟（孵育时间可根据细胞类型的不同做调整)。如果蛋白表达量低，建议结合超声粉碎，置冰上后，采用300w,10s超声/10s间隔,超声20min，至菌液变清；若目的蛋白不稳定，可冰孵，且时间可以减少，裂解液内加入0.2倍体积50%甘油也可以稳定目的蛋白。

4. 15000g，离心10分钟；

5. 将上清转移至新的离心管中，即得到可溶性蛋白，可应用BCA法进行蛋白定量及后续实验。

注意：

1. 该抽提试剂中不含有蛋白酶抑制剂，用户可根据具体情况添加蛋白酶抑制剂、还原剂、螯合剂等。

2. 当提取物粘度较高或提取的蛋白以包涵体形式存在时，建议在加入溶菌酶和DNaseⅠ.

3. 如果在提取纯化过表达蛋白的过程中，得到的大部分蛋白都在沉淀中，那么目的蛋白可能以包涵体的形式存在，可使用包涵体蛋白溶解液进行溶液，也可以优化蛋白表达条件，增加可溶性蛋白的表达。