​支原体检测试剂盒（PCR方法）

货号：ZK-PL4008

规格：50次

描述：

支原体污染已经成为细胞培养中高度重视的问题，因此定期进行支原体污染检测十分必要。本试剂盒采用PCR方法，能特异性检测各种培养细胞生物材料（如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等）中支原体的污染。试剂盒使用的混合引物针对支原体 16s rRNA 序列保守区域设计，可直接使用细胞培养液作为 PCR 模板，特异性扩增支原体DNA，搭配配套的 Mix（2×）组分，一小时内即可完成，灵敏度高，可检测低至20个拷贝的支原体。

效期：
有效期12个月

储存与运输：

冰袋（wet ice）运输；-20℃保存

组成：

PCR Mix（2×）	1 mL
Primer Mix	100 μL
Positive Control	50 μL
Free Water	1 mL

操作步骤
1. 样品准备：取适量待检细胞培养上清于洁净的PCR 管中，利用 PCR 仪 95℃热处理5 min后作为模板。血清样本可用Free  Water 稀释后，取适量样本于洁净的PCR管中，利用PCR仪95℃热处理 5min 后作为模板；
2. PCR 体系配制：每次实验需设置阴性对照（将 1μL待检样品换成等量的Free  Water）与阳性对照（在1μL待检样品中加入0.5μL Positive Control 后一起作为Template），实验时戴一次性口罩与手套，谨慎操作，防止操作不当引入外源支原体污染；

Component	Volume
Template	1 μL
Primer  Mix	2 μL
PCR Mix（2×）	10 μL
Free   Water	To 20 μL

3. PCR 程序设置：

Step	Temperature	Time	Cycles
Initial Denaturation	98℃	2 min	1
Denaturation	98℃	20 s	30
Annealing	56℃	25 s
Extension	72℃	10 s
Final extension	72℃	5 min	1
Hold	4-16℃	Forever

4. 凝胶电泳：取10μL PCR 产物，使用 1%琼脂糖凝胶进行电泳检测；
5. 结果分析：每次实验通过与阴性对照、阳性对照检测结果比较确认样品支原体污染情况，阳性条带大小500 bp左右。如阴性对照检测结果中有条带很有可能是PCR体系中出现污染，建议重新实验确认结果。如有必要，也可对PCR产物进行常规测序，以确定具体的支原体种属。

注意事项：
1. 本试剂盒可以检测M.orale，M.arginini，M.bovis，M.fermentans，M.gallisepticum，M.hominis， M.pirum，Ureaplasmaspp，M.hyorhinis，M.pneumoniae，A.laidlawii等至少 11 种以上支原体污染。
2. 所有试剂在使用前于冰上彻底解冻、混匀，使用完毕后于-20℃保存。
3. 每次实验必须设置阴性对照、阳性对照，实验组建议设置样品模板梯度。
4. 操作时必须佩戴口罩，严格按照 PCR 操作标准，防止引入外源污染影响实验结果。
5. 为了确保细胞实验的可靠性及稳定性，建议定期进行支原体污染检测。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。​​