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总铁离子含量比色法检测试剂盒
货号:ZK-PL3972
规格:100次
300次
描述:铁是人体必需的元素之一,对人体的新陈代谢和身体健康具有重要作用,血液中铁的含量不足,就会造成缺铁性贫血。铁存在于人体所有的细胞内,各组织、器官包括各内分泌腺都含有铁。肝脏、脾脏和肺组织内含量较为丰富。成人体内含铁3~5克,大部分都以蛋白质复合物形式存在,极少部分以离子的形态存在。本试剂盒采用亚铁嗪比色法可以定量细胞铁离子,线性范围5~300uM。产品包括标准品和空白对照。
组成:
1. 细胞裂解液: 20ml
2. 缓冲液: 5ml
3. 检测剂: 3ml
4. 标准品: 1ml
5. 稀释用液: 20ml
储存:4℃保存,6个月有效。
适用范围:该试剂盒可用于培养细胞中铁离子定量检测。
用户自备:4.5%高锰酸钾溶液5ml(4.5%为质量体积比)。
操作步骤:
1. 样品准备(以两百万细胞数为例):收集细胞,然后用预冷的PBS 洗两遍,将PBS吸弃,加入100-200ul裂解液,剧烈震荡或涡旋20-30S,置于摇床裂解2h,12000rpm 5min 取上清进行后续铁离子浓度测定和蛋白浓度测定。
注意;摇床裂解后,如果样本粘稠,请使用超声破碎仪超声,12000rpm 5min 取上清。
2. 标准品的稀释:用试剂盒提供的稀释用液将3mM 的标准品母液稀释为:300uM、150uM、75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀释并设置0浓度对照反应管。
3. 将缓冲液与4.5%高锰酸钾溶液按1:1混匀,称为混液A。
4. 参考下表,设置空白对照管、标准品管和样品管。如果样品中的铁元素含量过高,用裂解液适当稀释后再进行测定。
空白对照 | 稀释后的标准品 | 裂解的样品 | |
稀释用液 | 100μl | - | |
混液A | 100μl | 100μl | 100μl |
样品 | - | - | 100μl |
标准品工作液 | - | 100μl | - |
5. 混匀,60℃ 孵育1h。
6. 冷却至室温,将管盖与管壁上的液滴离心入管底。
7. 加入30ul 铁离子检测剂,混匀,室温孵育30min,12000rpm 5min 取上清。
温馨提示:如果样本中出现络合物请先震荡混匀,12000rpm 5min 取上清
8. 取200ul或适当体积 于96孔板,在550nm测定吸光度。如果不能测定550nm,也可以在540nm~580nm范围内检测。
9. 绘制标准曲线并计算铁离子浓度。
10. 建议用BCA方法测定步骤1中样本上清中的蛋白浓度,进行铁离子浓度校正。
说明:
1. 本试剂盒不受锰离子、镁离子、镍离子和锌离子等的干扰。
2. 操作过程中,样品与试剂等避免与铁器接触,以防污染。
3. 所测样本的值高于标准曲线的上限,应稀释样品后重新测定。
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作,检测试剂有腐蚀性,请小心操作,若不慎沾到皮肤上请马上用清水冲洗干净。
5. 该试剂盒仅供科学研究使用。
0755-28715175/33164177