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高脂样本蛋白裂解液
规格:100ml 500ml
货号:ZK-PL3498
描述:
高脂样本蛋白裂解液采用优化配比,特别适用于脂质含量高的样本,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分有较强裂解作用,使用高脂样本蛋白裂解液特别适于提取膜蛋白以及western blot实验等
储存:
4 ℃保存 12个月有效
制备细胞裂解产物
1. 800g 4℃离心5分钟收集培养细胞,估计细胞离心后的体积(PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV);
2. 每50-100 ml PCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液(250-500 ml),冰浴中放置10分钟,并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒;
3. 12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物;
4. 假如所得蛋白产物较为粘稠,95℃加热5分钟,然后迅速冰浴5分钟,12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物。
制备组织裂解产物
1. 取50-100 mg组织在冰上剪成碎片,用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS;
2. 加入 0.5-1 ml 预冷 RIPA 裂解缓冲液;
3. 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次,直到95%的细胞被破碎,然后在冰浴中放置10分钟,并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒;
4. 12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物;
5. 假如所得蛋白产物较为粘稠,95℃加热5分钟,然后迅速冰浴5分钟,12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物;
6. 20%的甘油保存于 -70oC 或-20oC。
注意:
1. 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物;
2. 高脂样本蛋白裂解液中未加入蛋白酶抑制剂。
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