产品名称： 猪干扰素β(IFNβ) ELISA试剂盒

货号： ZK-P6468

英文名称: porcine Interferon Beta (IFNb) ELISA Kit

品牌：9游总区生物ZIKER；

检测方法：酶联免疫分析检测法；

规格：48T/96T；

包装：盒；

有效期：6个月；

保存温度： 2-8℃;

应用范围：仅供科研研究实验使用，不可用于临床诊断使用；

可检测样品形式：血清/血浆/组织匀浆/细胞培养上清/相关生物液体。

一、检测范围、 OD值：具体请咨询在线客服 ，或者来电索要详细说明书！

二、需自备试剂和器材

1． 标准规格酶标仪。

2． 自动洗板机。

3.  37℃恒温箱。

4． 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器。

5． 使用中性 PBS 或 TBS 作为洗涤液。

6  蒸馏水。

7. 吸水纸。

三、样品的准备和保存

样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。

细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，超过2个月冻存于-80℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

四、操作注意事项

1.  试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.  浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  所有液体组分使用前充分摇匀。

五、洗板方法

1、手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2、自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

六、实验详细操作程序

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔加待测样本50μL。

3.  样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

七、结果判断:

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

发表文章文献：
p53 mediated IFN-β signaling to affect viral replication upon TGEV infection.
Li Ding a,1, Jiawei Li a,1, Weihao Li a, Zhenhua Fang b, Na Li a, Qiqi Guo a, Haoyue Qu a, Dan Feng a,Jiangyue Li a, Meiling Hong a. Veterinary Microbiology 227 (2018) 61–68.